Jingan M-MuLV反轉錄酶(Jingan M-MuLV Reverse Transcriptase)是一種經過改造和優化的M-MuLV反轉錄酶。和普通的M-MuLV反轉錄酶相同,Jingan M-MuLV反轉錄酶 也是一種依賴于RNA或DNA模板的DNA聚合酶,可以以RNA或DNA為模板在引物存在的情況下完成互補DNA鏈的合成;同時具有Ribonuclease H(RNase H)酶活性,可以選擇性剪切RNA和DNA雜合雙鏈 中的RNA,但不剪切單鏈RNA或雙鏈RNA。 特點:Jingan M-MuLV反轉錄酶可以合成長達13kb的cDNA,而普通的M-MuLV反轉錄酶僅能合成長達9kb的cDNA;Jingan M-MuLV反轉錄酶 的最適反應溫度為42℃并且在50℃時仍然有很高活性,可以避免普通的M-MuLV反轉錄酶在37℃反應時的一些不足。 用途:Jingan M-MuLV反轉錄酶常用于在獲得總RNA或mRNA后cDNA第一條鏈的合成。Jingan M-MuLV反轉錄酶合成的cDNA第一條鏈后續可 以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二條鏈的合成等。Jingan M-MuLV反轉錄酶也可以用于DNA探針的標記,以及通過引物延伸(primer extention)來分析RNA。 來源:本Jingan M-MuLV反轉錄酶由大腸桿菌表達,表達的基因為經過突變優化的編碼Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase的pol基因片斷。 活性定義:One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10 min at 37℃. Enzyme activity is assayed in 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 6 mM MgCl2, 10 mM DTT, 40 mM KCl, 0.5 mM dTTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP, 0.4 mM polyA·oligo(dT)12-18。 純度:不含DNA內切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含Jingan M-MuLV反轉錄酶本身含有的RNase H酶活力以外的RNA酶,滿足常規反轉錄合成cDNA第一條 鏈等的需要。 酶儲存溶液:50 mM Tris, pH 8.3, 100mM NaCl, 1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% Triton X-100 and 50% glycerol。 Reaction Buffer(5X):250 mM Tris, pH 8.3 at 25℃, 250 mM KCl, 20 mM MgCl2, 50 mM DTT。 失活或抑制:70℃孵育10分鐘可以導致Jingan M-MuLV反轉錄酶失活;EDTA、EGTA等螯合劑、無機磷酸鹽或焦磷酸鹽以及聚氨(polyamine)對Jingan M-MuLV反轉錄酶有抑制作用。
本產品用于體積為20微升的反轉錄體系時足夠進行10次反轉錄反應。 包裝清單: