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        一、細胞的無菌操作環境

   在細胞培養的過程中，防止污染是決定培養成功或失敗的首要條件。無菌技術就像是一道屏障很大程度上保護細胞不受環境微生物的污染。無菌環境的基本要素包括：

        1、實驗員穿戴好一次性帽子、口罩、手套以及實驗服才能進入實驗室；

        2、實驗操作前，打開超凈工作臺紫外燈照射30-60min滅菌，后用75%酒精擦拭操作臺面并打開超凈工作臺風扇運轉通風；

        3、槍頭、培養皿、離心管等常用耗材需要通過傳遞倉紫外消毒后進入細胞間，再拿到超凈臺內再行拆封使用；

        4、冰箱中取出培養基復溫，將培養基以及實驗室內配置的溶液試劑噴涂75%的酒精后放入超凈工作臺中；

        5、在打開培養箱之前，實驗員的手和培養箱需要先噴涂酒精擦拭，消毒后再將細胞從培養箱中取出放置于超凈工作臺中。

        二、細胞無菌操作的要點

  根據操作的需求，我們將工作臺劃分為三個區域：分別是潔凈區、操作區和污染區。

        培養基槍頭、培養皿等細胞培養常用的試劑耗材放置在潔凈區，酒精燈、移液槍、待處理的細胞等操作中需要用到的物品放置在操作區，打火機、記號筆、廢液缸等放置在污染區。 進行操作前，需要要點燃酒精燈。我們將酒精燈火焰附近10cm范圍內視為無菌區，為了保證實驗過程中的無菌環境，所有的操作盡量在無菌區進行。操作時我們要注意：

        1、打開瓶蓋前，需要對瓶頸、螺旋蓋進行灼燒，瓶蓋打開后將敞開一側朝下放在無菌區內。瓶口敞開期間，手和其他物品不可從上方經過。移液操作盡可能迅速，操作完后立即灼燒螺旋蓋消毒后蓋上。

        2、移液操作時用到的槍頭必須保證無菌，移液槍在使用時槍身不能碰到容器內側，如果移液槍在使用過程中被液體污染需更換新的移液槍。

        3、無菌槍頭均為一次性使用，如果在使用過程中不小心脫落，需更換新槍頭。移液過程中如果有試劑不小心滴落在超凈臺面上，需用75%的酒精擦拭干凈。

        4、廢液在棄去時，需使用移液槍操作，不可直接倒入廢液缸中，以防液體飛濺污染瓶口。全部操作結束后，方可蓋上酒精燈蓋熄滅火焰。

        5、用完的試劑用封口膜封住后，移出操作臺，放回4度儲存。潔凈的槍頭、培養皿、移液槍等可繼續放置在超凈臺內，廢液缸需清理洗凈，用酒精消毒后再放回超凈臺。

        6、實驗臺面用75%酒精噴灑后再用無菌布擦拭干凈，最后關閉玻璃門，打開紫外燈消毒30-60min，為下一次的實驗做準備。